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更新時間：2024-09-09
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賽默飛（Thermo Fisher Scientific）的熒光分光光度計是一種用于測量樣品熒光特性的儀器，常用于分析生物分子、藥物、環(huán)境樣品和其他化學(xué)物質(zhì)。以下是其常規(guī)操作流程：
儀器檢查與開機：
確保熒光分光光度計已經(jīng)正確連接電源和計算機。
打開儀器電源，等待儀器自檢和初始化完成。
打開相應(yīng)的軟件（通常是Thermo Fisher的控制軟件）進行測量操作。
準(zhǔn)備樣品：
樣品的濃度和體積應(yīng)根據(jù)實驗需求進行適當(dāng)準(zhǔn)備。
如果樣品需要稀釋，使用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ缛ルx子水、緩沖液等）進行稀釋，確保樣品熒光強度在檢測范圍內(nèi)。
清潔比色皿：
使用無塵擦紙擦拭比色皿，確保其表面無指紋或污漬。
根據(jù)需要，選擇合適的比色皿（通常為石英比色皿，適合紫外和可見光區(qū)的測量）。
用溶劑沖洗比色皿，避免樣品殘留。
選擇合適的激發(fā)和發(fā)射波長：
根據(jù)實驗需要或文獻參考，確定熒光激發(fā)波長和發(fā)射波長。
在軟件中設(shè)置這些參數(shù)以進行測量。
空白樣品準(zhǔn)備：
空白樣品通常是與測量樣品相同的溶劑或緩沖液，用于校準(zhǔn)和消除背景干擾。
將空白樣品注入比色皿，放入熒光分光光度計的樣品槽。
測量空白：
在軟件中選擇“空白測量"功能，記錄空白的熒光信號。這一步是為了校正背景信號，確保后續(xù)測量的精確性。
測量完成后，取出比色皿，清潔并準(zhǔn)備加入實驗樣品。
加入樣品：
將已準(zhǔn)備好的樣品注入清潔的比色皿，通常注入量為比色皿容積的2/3左右，避免過滿或過少。
將比色皿放入熒光分光光度計的樣品槽，確保放置穩(wěn)固。
設(shè)置測量參數(shù)：
在軟件中設(shè)定測量模式，如熒光光譜掃描、時間掃描或定量分析。
設(shè)置激發(fā)波長和發(fā)射波長，確保選擇適合的熒光探針或標(biāo)記物的波長。
測量：
點擊“開始測量"按鈕，儀器將自動激發(fā)樣品并采集熒光發(fā)射數(shù)據(jù)。
數(shù)據(jù)會在軟件中實時顯示，包括熒光強度值及相應(yīng)的光譜圖。
結(jié)果查看：
測量結(jié)束后，軟件界面會顯示熒光強度、峰值位置和其他相關(guān)數(shù)據(jù)。
如進行光譜掃描，用戶可以查看整個光譜的發(fā)射曲線，找到最大熒光峰值的位置。
數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出：
軟件通常允許保存測量結(jié)果和導(dǎo)出數(shù)據(jù)，便于后續(xù)分析或?qū)嶒炗涗洝?/p>
可將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為Excel、PDF或圖形文件，以便進行進一步的分析或報告撰寫。
清理比色皿：
使用適當(dāng)?shù)娜軇┗蛉ルx子水清洗比色皿，避免樣品殘留污染下次測量。
使用無絨紙或空氣吹干比色皿，確保干燥后存放。
清潔儀器樣品槽：
若不慎將樣品灑入樣品槽，用適當(dāng)?shù)牟潦眉堓p輕清理儀器內(nèi)部，避免損壞光學(xué)系統(tǒng)。
關(guān)機與儀器保養(yǎng)：
關(guān)閉軟件并保存所有數(shù)據(jù)。
關(guān)閉熒光分光光度計電源，斷開電源插頭以確保安全。
定期進行設(shè)備校準(zhǔn)和維護，確保儀器的長期準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
熒光信號過弱或無信號：
樣品濃度過低，考慮適當(dāng)增加濃度或延長激發(fā)時間。
激發(fā)波長或發(fā)射波長選擇錯誤，確保選用合適的參數(shù)。
比色皿清潔不，檢查比色皿表面是否有污漬影響光路。
熒光信號過強或超出范圍：
樣品濃度過高，建議稀釋樣品。
減少激發(fā)光強度或降低PMT（光電倍增管）增益以避免飽和。
基線漂移或背景噪音高：
重新測量空白，確?？瞻兹軇┲袩o熒光物質(zhì)干擾。
檢查儀器內(nèi)部光學(xué)系統(tǒng)是否清潔，清理樣品槽。
賽默飛熒光分光光度計操作簡單、功能強大，是生物化學(xué)分析中的工具。通過合理的準(zhǔn)備、設(shè)置與操作，科研人員可以獲得高質(zhì)量的熒光測量數(shù)據(jù)，為各類分子分析和研究提供堅實的基礎(chǔ)。
當(dāng)前位置：
